Servicio de Cristalografía
SERVICIOS OFRECIDOS
CRISTALIZACIÓN DE PROTEÍNAS
Búsqueda y mejora de condiciones de cristalización en nanovolúmenes (0.1-0.5 μl).
Se realizan dos tipos de cribados o “screenings”:
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Screenings comerciales
El servicio dispone de más de 15 screenings comerciales, entre ellos: CSI y CSII, INDEX, WIZARD, JBSI, JBS II, MIDAS, JCSG+, PACT (ver información aquí)
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Screenings a la carta
El servicio puede realizar el cribado de condiciones diseñadas por el mismo usuario. El programa CRISTALER WEB, accesible a los usuarios, permite un fácil diseño de placas generando y enviado automáticamente los ficheros requeridos al servicio de cristalización, así como un informe para el usuario.
Estos cribados se realizan en placas específicas. Pudiéndose optar por distintos modelos dependiendo del tipo de cribado y técnica a utilizar
Tipo de placas:
MRC2:
96 condiciones. 2 gotas sentadas por condición. Volumen máximo gota 2 μl. Screenings comerciales y a la carta
MRC3:
96 condiciones. 3 gotas sentadas por condición. Volumen máximo gota 2 μl. Screenings comerciales y a la carta
MRC1:
48 condiciones. 1 gota sentada por condición. Volumen máximo gota 5 μl. Screenings a la carta.
Placas SBS de 24 pocillos:
24 condiciones. Screenings a la carta. Estas placas se suministran sin poner las gotas de proteína, que deben ser puestas por el usuario.
Tabla resumen
| MRC2 | MRC3 | MRC1 | 24 | |
| Número de pocillos | 96 | 96 | 48 | 24 |
| Gotas de proteínas por pocillo | 2 | 3 | 1 | — |
| Gota | Sentada | Sentada | Sentada | Colgante |
| Máximo volumen de proteína | 2μl | 2μl | 5μl | —– |
| Volúmen de solución madre (en screenings a la carta) | 80μl | 40μl | 200μl | 500μl |
| Usos | Screenings comerciales y a la carta | Screenings comerciales y a la carta | Screenings a la carta | Screenings a la carta |
Solicitud de placas:
Para solicitar las placas hay que seguir las siguientes indicaciones. Ante cualquier duda contactar con los responsables
Precios:
El precio por placa para los usuarios internos del centro es de 25€.
Ante cualquier duda consultar con los responsables del servicio.
Recomendaciones:
* La proteína debe estar lo más pura posible. Es aconsejable hacer un gel nativo antes de empezar con la cristalización. A mayor homogeneidad de la muestra, mayores posibilidades de éxito.
* La proteína debe estar lo bastante concentrada. Depende de cada proteína, pero en general debe estar entre 5-15 mg/ml.
* El volumen de proteína disponible es un factor limitante. Para los screenings iniciales el mínimo es de 70 μL (3 screenings). Para el cálculo de proteína requerido por tipo de placa, número de placa y volumen de gota utilizar la siguiente aplicación.
TERMOFLUOR:
El servicio de cristalografía dispone de un screening propio para testar la estabilidad, por aproximación de termofluor, de una proteína en distintas condiciones de pH, salinidad y presencia de aditivos. El servicio puede preparar por encargo (reservas realizadas con el programa CRISTALER) placas de PCR de 96 pocillos (48 condiciones distintas, 2 pocillos por condición) utilizando dicho screening.